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GB4789.4-2024沙門氏菌檢驗新標(biāo)準(zhǔn)修訂內(nèi)容詳解
發(fā)布時間： 2024-04-08 點擊次數(shù)： 7069次2024-03-12衛(wèi)健委食品安全標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測評估司終于揭開了《GB4789.4-2024 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗新標(biāo)準(zhǔn)》神秘面紗，該標(biāo)準(zhǔn)將于2024年08月08日實施，相較于之前的GB 4789.4 -2016標(biāo)準(zhǔn)，新標(biāo)準(zhǔn)在設(shè)備和材料、培養(yǎng)基和試劑、檢驗程序和操作步驟等方面都進(jìn)行了修改和完善。這些變化不僅提高了檢驗的準(zhǔn)確性和可靠性，也更好地適應(yīng)了食品行業(yè)的發(fā)展需求。
而這些變化具體是怎樣的？下面小編和大家一起來一 一盤點分析：
章節(jié) 新標(biāo)準(zhǔn)變更內(nèi)容 看點分析 設(shè)備和材料變更情況 冰箱溫度范圍由2-5℃修改為“2-8℃" 因為冰箱冷藏室的溫度一般在2-8℃之間，修改后更符合大多數(shù)實驗室設(shè)備條件要求。 增加“恒溫裝置"溫度范圍“42℃±1℃、48℃±2℃" 這“恒溫裝置"小編理解是恒溫水浴鍋或者恒溫電熱箱這類儀器用于培養(yǎng)基或樣品保溫使用，“42℃±1℃"這是沙門氏菌檢驗中選擇性增菌用的培養(yǎng)溫度范圍，其實這溫度范圍放在“恒溫培養(yǎng)箱"那更合適。 增加“無菌量筒：容量50mL、無菌均質(zhì)杯、無菌均質(zhì)袋、無菌廣口瓶：容量500mL、無菌試管：15mmX150mm、18mmX180mm、無菌接種環(huán)：10L（直徑約3mm）、1L以及接種針" 對檢驗用器具規(guī)格明確，方便實驗室選用 增加“生物安全柜" 由于沙門氏菌2023版《人間傳染的病原微生物目錄》中在危害程度分類為第三類，對于實驗室開展活菌操作、樣本檢測實驗室生物安全等級需“BSL-2"，因此，增加此設(shè)備是生物安全必須。 培養(yǎng)基試劑 增加“氯化鎂孔雀綠大豆胨(RVS)增菌液" ，刪除“亞xi酸鹽胱氨酸（ＳＣ）增菌" 參考美國FDA BAM Chapter5、ISO6579-1：2017、AOAC等國外標(biāo)準(zhǔn)用 RVS 代替 SC 作為食品中沙門氏菌檢驗的選擇性增菌液，降低培養(yǎng)基對實驗人員危害的風(fēng)險。 增加“營養(yǎng)瓊脂(NA) " 用于可疑沙門氏菌的純培養(yǎng)。 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)成分用量不變，但pH由“7.0±0.2"修改為“7.6±0.2"；滅菌條件從“高壓滅菌121℃20min"修改為“煮沸,無須高壓滅菌"；牛膽鹽溶液使用牛膽鹽粉替代，硫代硫酸鈉溶液使用硫代硫酸鈉粉末替代。 由于TTB配方含4%碳酸鈣，因而該培養(yǎng)基pH偏堿性，通常是7.6±0.2，其實也很難人為調(diào)整至pH7.0±0.2的范圍內(nèi)，而且pH7.6±0.2也是沙門氏菌的最適生長范圍內(nèi)，同時能抑制不耐堿的雜菌生長。該培養(yǎng)基抑菌強(qiáng)，因此，不滅菌也不影響使用，且簡化配制節(jié)省時間。 其他培養(yǎng)基只是一般性修改，如“牛肉膏"修改“牛肉浸粉，“酵母膏"修改為“酵母浸粉"，以及pH測定統(tǒng)一為滅菌后25℃測。 培養(yǎng)基試劑配方配制更加規(guī)范。 其他 關(guān)于緩沖蛋白胨水、TTB、RVS、三糖鐵瓊脂等配方中無機(jī)鹽含結(jié)晶水與不含結(jié)晶水的用量修正處理，ISO6579-1：2017有說明。如，緩沖蛋白胨水標(biāo)準(zhǔn)配方中磷酸氫二鈉含12分子結(jié)晶水用量9g/L，如用無水磷酸氫二鈉使用3.57g/L。 檢驗程序圖 選擇性增菌用RVS替代了SC培養(yǎng)基，接種量1mL修改為0.1mL； 參考美國FDA BAM Chapter 5、ISO6579-1：2017國外標(biāo)準(zhǔn)修改。 TTB培養(yǎng)溫度從之前的42℃變更為“36±1℃或42±1℃" 根據(jù)樣品的背景菌含量選擇培養(yǎng)溫度，，可以有效的防止漏篩 調(diào)整可疑菌落初篩流程 流程圖更清晰易懂。 操作步驟-預(yù)增菌 增加“對于乳粉,無菌操作稱取25g樣品,緩緩傾倒在廣口瓶或均質(zhì)袋內(nèi)225mLBPW 的液體表面,勿調(diào)節(jié)pH,也暫不混勻,室溫靜置60min±5min后再混勻,置于36℃±1℃培養(yǎng)16h~18h。" 因為乳粉是經(jīng)過高溫噴霧干燥的產(chǎn)品，其中的沙門氏菌一般處于受損狀態(tài)。乳粉在BPW中室溫浸泡1小時緩慢水化，這樣有助于受損的沙門氏菌逐漸復(fù)蘇，之后再進(jìn)行預(yù)增菌操作，可以更好地保證檢驗結(jié)果的可靠性。 增加“對冷凍樣品可以采用在40℃～45℃的水浴中解凍不超過15min，或在2℃～8℃冰箱中緩慢化凍，但需要主要化凍時間不超過18h。" 操作更細(xì)化更完善 操作步驟-選擇性增菌 將之前的"增菌"步驟改成了"選擇性增菌 更加的準(zhǔn)確 將SC更換成RVS培養(yǎng)基，接種量從之前的1mL改成了現(xiàn)在的0.1mL RVS弱選擇性，減少接種量減少雜菌干擾 接種后TTB的培養(yǎng)溫度根據(jù)樣品的含菌量來進(jìn)行區(qū)分，低背景菌的樣品(如深加工的預(yù)包裝食品等)置于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,高背景菌的樣品(如生鮮禽肉等)置于42℃±1℃培養(yǎng)18h~24h" 培養(yǎng)溫度選擇更精準(zhǔn)，有利于降低雜菌量，提高檢出率 新增“如有需要，可將預(yù)增菌的培養(yǎng)物在2-8℃冰箱保存不超過72h，再進(jìn)行選擇性增菌" 操作更靈活，大大降低了周末加班的需求 分離 補(bǔ)充劃線前“振蕩混勻選擇性增菌的培養(yǎng)物" 細(xì)節(jié)描述更加詳細(xì)清楚，規(guī)范化操作 新增“如有需要，可將選擇性增菌的培養(yǎng)物在2-8℃冰箱保存不超過72h，再進(jìn)行分離" 操作更靈活，大大降低了周末加班的需求 生化試驗 可疑菌落挑選數(shù)量 “2個以上典型或可疑菌落“修改為"4個以上典型或可疑菌落" 新標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)說明這些菌落宜分別來自不用的選擇性增菌液的不同分離瓊脂，也可以選擇其中一個典型或者可以的菌落進(jìn)行試驗（對于有經(jīng)驗的實驗員可以大大降低其工作量） 純化培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂（NA）后面補(bǔ)充說明（或其他合適的非選擇性固體培養(yǎng)基） 也就是說，TSA、PCA這些非選擇行固體培養(yǎng)基可替代營養(yǎng)瓊脂。 附錄A.12.3qing化鉀培養(yǎng)基試驗方法有修改“將待測菌的純培養(yǎng)物用生理鹽水配制成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?滴加2滴~3滴菌懸液于qing化鉀(KCN)培養(yǎng)基,混勻后滴加一層無菌液體石蠟進(jìn)行密封。另外滴加2滴~3滴菌懸液于對照培養(yǎng)基。在36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h,觀察結(jié)果。qing化鉀(KCN)培養(yǎng)基內(nèi)有細(xì)菌生長者為陽性(不抑制),培養(yǎng)48h無細(xì)菌生長者為陰性(抑制)。" 明確接種菌液濃度為“0.5麥?zhǔn)蠞岫?，接種量“2滴~3滴"，避免接種量過大導(dǎo)致假陽性；還有增加＂接種混勻后滴加一層無菌液體石蠟進(jìn)行密封＂由于qing化鉀不穩(wěn)定容易分解失效，因此，加石蠟密封避免造成假陽性反應(yīng)。 “符合表3中A1者,為沙門氏菌典型的生化反應(yīng)"后面補(bǔ)充“進(jìn)行血清學(xué)鑒定后報告結(jié)果" 明確的指出符合沙門氏菌典型的生化反應(yīng)需要進(jìn)行血清學(xué)鑒定后報告結(jié)果 2016版“必要時按表５進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒定"修改為2024版中“必要時,按表5進(jìn)行沙門氏菌種和亞種的生化鑒定" “生化群"用“種和亞種"替代，更易懂； 在表5沙門氏菌種和亞種的生化鑒定中增加“腸炎沙門氏菌、邦戈爾沙門菌種名"以及腸炎沙門氏菌種內(nèi)對應(yīng)的6個亞種和生化群分型"；生化反應(yīng)項增加“明膠酶、L(+)-酒石酸鹽、半乳糖醛等8項" 表5 是在確定是沙門氏菌屬基礎(chǔ)上再進(jìn)一步鑒定至種和亞種時使用，這一般高要求能力驗證項目會用到，對于食品微生物限liang檢驗，鑒定到沙門氏菌屬即可報告結(jié)果。 多價菌體抗原(O)鑒定 Vi抗原去除的煮沸操作修改為“在沸水中水浴20min~30min" 操作更明確 增加備注“不同廠商沙門氏菌診斷血清的組成、鑒定操作及結(jié)果判斷,可能存在差異。使用商品化的沙門氏菌診斷血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定時,應(yīng)遵循其產(chǎn)品說明?！?/span> 備注了不同廠商因為血清組成不同，可能存在差異，應(yīng)以產(chǎn)品說明為準(zhǔn)。 H 抗原的鑒定 2016版的“小倒管法"修改為2024版的“小套管法"，對半固體瓊脂的體積、小玻管的尺寸、接種后的培養(yǎng)溫度有了更為準(zhǔn)確的敘述；培養(yǎng)基的使用溫度從50℃改為48℃。 操作描述更詳細(xì)更嚴(yán)謹(jǐn)。
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